中国渔业质量与标准 , 2019, 9(3):34-. doi:10.3969/j.issn.2095-1833.2019.03.005
摘要:软骨藻酸是一种主要由海洋硅藻中的拟菱形藻属(Pseudo-nitzschia)藻类产生的具有强烈神经毒性的物质,该类物质可以与谷氨酸神经递质的受体相结合,影响生物体内正常的神经信号传递,导致神经系统紊乱,并对与记忆有关的区域产生明显的神经毒性作用。作为一种天然的海洋药物,软骨藻酸还可以用于害虫的防治及科学研究等领域。为了更好地研究其产毒机理、有效预防其危害、合理开发利用其杀虫特性,文章综述了软骨藻酸的理化性质,重点分析了影响软骨藻酸产生的主要因素,包括藻种种类及生长周期、营养元素、细菌和微量金属等。这些因素或是间接影响藻类的生长环境,或是直接作用于细胞的生理活动,从而影响软骨藻酸的产生。总结分析了目前测定软骨藻酸含量的常用技术方法,如生物分析法、高效液相色谱法、酶联免疫测定、湿度光照和生物传感器等,阐述各种技术的适用情况,认为高效液相色谱、ELISA检测盒及快捷检测试纸条具有更高应用价值。同时,文章对软骨藻酸未来的研究方向和产业应用进行了展望,以期在预防其危害的同时充分开发利用其潜在价值。
中国渔业质量与标准 , 2017, 7(2):19-. doi:10.3969/j.issn.2095-1833.2017.02.004
摘要:能力验证是实验室管理水平和检验技术能力的综合表现#参加能力验证有助于提升实验室技术能力,文章对近几年水产品中药物残留检测能力验证存在的主要问题进行梳理,包括实验中缺少试剂空白及样品空白、定量方法不合理、检测人员对标准方法中技术要点把握不到位等,并对做好水产品中药物残留检测能力验证考核实验需要把握的几个关键点进行了探讨分析,旨在促进实验室管理技术水平的提高和实验室整体能力的提升。
渔业研究 , 2016, 38(4):343-. doi:10.14012/j.cnki.fjsc.2016.04.011
摘要:多环芳烃作为持久性有机污染物,其来源广泛,易在生物体内富集且难以降解。水产品因能够为人体提供大量的蛋白质、脂肪和矿物质等营养物质而备受青睐,但由于受到水域环境污染的影响,其体内含有不同程度的多环芳烃污染物(PAHs)。而水生生物体内的PAHs通过食物链传递,在人体内蓄积,进而威胁人体健康。本文就PAHs的来源、分布迁移、在水产品中的检测方法及污染特征等方面进行综述。
水产学报 , 2014, 38(1):136-. doi:10.3724/SP.J.1231.2014.48778
摘要:为了建立一种能在临床上快速、准确检测杂交鳢弹状病毒(HSHRV)的TaqMan 实时荧光定量PCR方法,利用PCR 技术扩增HSHRV-C1207G蛋白的全长序列,构建重组质粒,作为荧光定量PCR 的标准品,根据HSHRV-C1207 G 蛋白的保守序列,设计合成了一对能特异性扩增143 bp 片段的引物和TaqMan 探针,以标准品为模板建立HSHRV 的TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价。结果显示:建立的荧光定量PCR 检测方法标准曲线有较好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,斜率为-3.290;荧光定量PCR 最低可以检测到10个病毒核酸分子拷贝,而传统PCR 方法最低可检测到1×103个拷贝;38个平行样品重复性实验组内变异系数为0.84%;对其他6种水产养殖常见病毒均无扩增反应。应用该方法对采集的21 份患病鳢样品进行检测,其中18 份为阳性,与细胞分离和电镜观察结果相同;以传统PCR 方法检测同样的样品,仅13 份为阳性。本研究建立的TaqMan 实时荧光定量PCR 方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于临床HSHRV 的检测,对病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义。
水产学报 , 2019, 43(3):679-. doi:10.11964/jfc.20180511283
摘要:为建立实现牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在贝类宿主组织中的精确定位方法,基于原位杂交PCR (ISPCR)技术建立了OsHV-1的间接原位杂交PCR (indirect ISPCR)检测方法,并利用该方法对OsHV-1在魁蚶主要器官的分布情况进行了检测和分析。首先选择适合原位杂交PCR的引物,在载玻片上实现对原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,然后与使用相同引物制作的地高辛标记核酸探针进行原位杂交,最后通过免疫酶标技术显示样本内OsHV-1的组织分布。为了达到最佳检测效果,对间接ISPCR的扩增循环数以及组织消化的蛋白酶K浓度进行优化。结果显示,最适PCR扩增循环数为20,蛋白酶K浓度为20 μg/mL。利用经优化的间接ISPCR检测方法,对OsHV-1在魁蚶外套膜、鳃、肝胰腺、斧足和闭壳肌5个样本中的组织分布情况和亲嗜性进行检测和分析。病毒阳性信号主要分布于魁蚶外套膜结缔组织中浸润的血细胞和成纤维细胞、肝胰腺和鳃浸润的血细胞、斧足和闭壳肌中坏死肌肉细胞的细胞核中。本研究建立的间接ISPCR检测方法具有灵敏、特异和精确定位的优点,通过组织切片上显示的病毒核酸阳性信号,能判别OsHV-1在不同组织部位的分布特点和受感染的细胞类型;适用于OsHV-1感染的确诊、病毒对不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究。
上海海洋大学学报 , 2014, 23(4):556-. doi:
摘要:应用巢式聚合酶链反应(nested PCR)建立了一种检测异育银鲫武汉单极虫(Thelohanellus wuhanensis)基因组DNA的方法,提取的DNA作为模板进行两次扩增,第一次扩增用单极虫18S rRNA 序列通用引物:5’-CTGCGGACGGCTCAG TAAATCAGT-3’和5’-CCAGGACATCTTAGGGCATCACAGA-3’,扩增长度为1 584 bp;第二次依据第一次扩增产物中武汉单极虫特有的高度保守区设计特异性引物:5’-ACCCACTTCTGTGGC CTTTC-3’和5’-AATCCGACCTACAACGCTGG-3’,扩增长度为853 bp。结果表明,通过PCR反应体系中退火温度、dNTP、Mg2+、延伸时间、扩增循环数和模板浓度的优化,优化后的巢式PCR最低DNA检测量达10 fg,优化后比常规 PCR 检测的灵敏度高104倍。因此,本文所建立的巢式PCR检测方法适合于水环境或水生动物中武汉单极虫的微量检测,也为异育银鲫武汉单极虫病的诊断和流行病调查提供了一种高灵敏的检测技术。
河北渔业 , 2017, 0(6):49-. doi:10.3969/j.issn.1004-6755.2017.06.014
摘要:综述了水产品中硝基呋喃类药物代谢规律,分别介绍了硝基呋喃原药及其代谢物的检测方法,比较了各种方法在实际应用中的优缺点,并对检测方法进行了展望,以期为水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物检测的研究提供帮助。
大连海洋大学学报 , 2019, 34(5):757-. doi:10.16535/j.cnki.dlhyxb.2018-231
摘要:无乳链球菌Streptococcus agalactiae作为罗非鱼Tilapia的主要病原菌,因其传染性强、致死率高,给罗非鱼养殖产业带来巨大的经济损失。无乳链球菌可通过多种途径感染罗非鱼,不仅能在宿主血液内增殖,随巨噬细胞在体内游走、侵染其他组织,还可透过血-脑屏障,侵入脑组织,导致罗非鱼呈现典型的临床症状和组织病理学变化。无乳链球菌的检测方法有多种,基于分子生物学的技术手段被广泛运用,通过分子分型的方法可获得菌株分子遗传多样性信息,有助于解析菌株的流行和传播规律。目前,抗菌药物仍是防控该病的首选,但长期用药和滥用药会加快菌株产生耐药性,疫苗是防控无乳链球菌病的有效途径,但适合大规模商业化应用的疫苗较少。本研究中全面归纳了罗非鱼无乳链球菌的病原学、流行病学、病理学、致病机制、检测方法、分子分型、耐药性及疫苗等方面最新研究进展,并提出存在急需解决的问题,旨在为防控罗非鱼无乳链球菌病提供参考资料。
中国渔业质量与标准 , 2019, 9(3):26-. doi:10.3969/j.issn.2095-1833.2019.03.004
摘要:三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)广泛分布于中国四大海域,以黄海、东海产量居高。三疣梭子蟹的蛋白质、脂肪、氨基酸和必需脂肪酸等成分含量可直接反映其营养品质,而游离氨基酸、脂肪酸、甜菜碱、核苷酸、糖原及矿物质等非挥发性成分和挥发性成分均与三疣梭子蟹的风味品质存在密切关系。文章根据近年来三疣梭子蟹营养和风味品质的相关研究成果,总结分析了三疣梭子蟹的性别、可食用部位以及养殖方式、成熟阶段及饵料组成等因素对三疣梭子蟹的营养成分及风味品质的影响,并对现有的营养成分的测定方法进行了归纳比较,以期为三疣梭子蟹的养殖生产及品质评价工作提供参考。
中国渔业质量与标准 , 2017, 7(5):18-. doi:10.3969/j.issn.2095-1833.2017.05.003
摘要:石油污染事故导致石油烃成为近海中最主要的污染物之一,大量的石油烃进入水体对水生动物造成了严重的危害。有效的测定方法能及时监测水生动物中石油烃的含量,对石油污染事故及时做出应对措施。文章就石油烃的种类、对水生动物的影响以及石油烃和多环芳烃的检测方法方面进行了梳理,以期能够对相关工作提供借鉴和参考。