水产学报 , 2019, 43(11):2327-. doi:10.11964/jfc.20190311691
摘要:精子发生是指由精原细胞发育为成熟精子的过程。在大多数的物种中,此过程涉及到与DNA结合的碱性蛋白的变化。体细胞类型的组蛋白全部或者部分被过渡蛋白替代,随后又被碱性更强的鱼精蛋白替代,伴随蛋白的逐级替换,此类动物精子核为浓缩的,染色质包装紧密。中华绒螯蟹的精子染色质呈松散的结构,其具体机制尚不明确。本实验利用PCR技术克隆了中华绒螯蟹组蛋白H2A基因的编码区,制备了其多克隆抗体,通过免疫荧光检测了组蛋白H2A在精子发生中的变化特征。结果显示,中华绒螯蟹组蛋白H2A基因编码区为369 bp,编码123个氨基酸,预测蛋白分子量为13.1 ku。氨基酸序列比对发现,H2A与凡纳滨对虾和斑节对虾的同源性极高,均为99.19%。免疫荧光显示,H2A存在于中华绒螯蟹精子发生的整个过程,精原细胞和精母细胞的H2A在细胞核和细胞质均有表达,在精细胞和成熟的精子中的H2A主要存在于细胞核。中华绒螯蟹成熟精子核内组蛋白H2A的保留可能与其非浓缩核有一定关联。
水生生物学报 , 2015, 39(2):331-. doi:10.7541/2015.44
摘要:为研究内分泌干扰物己烯雌酚(DES)对鱼类精巢发育和配子发生的影响, 研究用DES(0.1、1和10 μg/L, 暴露20d)对内分泌干扰研究的经典模式动物——斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行了处理。组织学研究结果表明, DES严重影响斑马鱼精子发生。同时, 研究克隆了斑马鱼与生殖细胞发育和减数分裂相关的vasadmc1的部分cDNA, 对其组织和细胞表达模式进行了研究。结果表明, vasa仅表达于精巢的精原细胞、初级精母细胞和卵巢不同时期的生殖细胞; 而dmc1则表达于精巢精母细胞和卵巢卵母细胞发育早期。半定量PCR结果表明, DES处理后vasa的表达没有明显变化; 而dmc1的表达则被明显抑制, 且呈时间依赖性和剂量依赖性效应; 而转录因子dmrt1和雄激素合成关键酶基因P450 11β的表达也被显著抑制。因此本研究推测, DES可能通过抑制dmrt1和P450 11β的表达诱导了斑马鱼生殖细胞凋亡; 并通过抑制dmc1的表达阻碍了减数分裂。
中国水产科学 , 2020, 27(8):868-. doi:10.3724/SP.J.1118.2020.19305
摘要:G蛋白偶联雌激素受体(Gper)是一种膜雌激素受体,介导雌激素的非基因组途径。为研究G蛋白偶联雌激素受体基因(Gper)在中华鳖(Pelodiscus sinensis)性腺分化和精巢中的作用,本研究利用RACE法克隆了中华鳖Gper cDNA全长序列,利用qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育阶段的性腺中的表达模式,并通过来曲唑(letrozole)和Gper抑制剂G-15处理雄鳖初步分析Gper在精巢中的作用。结果显示,中华鳖Gper cDNA序列全长2023 bp,包含705 bp 5'非编码区、241 bp 3'非编码区和1077 bp开放阅读框,编码358个氨基酸,其氨基酸序列上有7个跨膜结构域和Asp-Arg-Tyr(DRY)三联体结构,基因编码蛋白分子量为41.084 kD,等电点为6.844。Gper基因在各组织均有表达,其中脑中表达量最高,其次为卵巢;不同孵化温度条件下,性腺分化关键时期的Gper表达量变化呈相同趋势:16期表达量最高,随着性腺分化过程表达量显著降低。Letrozole处理组中Gper表达量显著降低,G-15处理组Esr1和Esr2表达量明显升高;G-15处理组精巢中,精子发生与促细胞凋亡相关基因表达量显著升高。结果表明,Gper可能参与中华鳖性腺分化早期过程,并调控雄性生殖细胞增殖。
中国水产科学 , 2020, 27(6):637-. doi:10.3724/SP.J.1118.2020.19267
摘要:为了解四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)精巢的组织结构和精巢发育及精子发生的组织学和超微结构变化,运用组织切片HE染色和透射电镜技术对养殖四指马鲅的精巢发育过程进行观察。结果显示,四指马鲅精巢位于腹腔背侧,紧贴中肾和鳔的腹面,为一对延长的扁平带状器官,呈灰白色,两条精巢于后端融合,呈“Y”字形,组织学上属典型小叶型精巢;根据精巢发育及精子发生的组织学特点可将其分为6个时期:3月龄精巢发育至第I期(精原细胞增殖期),4月龄发育至第II期(精母细胞增长期),5~7月龄发育至第III期(精母细胞成熟期),7~9月龄发育至第IV期(精子开始出现期),最早在10月龄发育至第V期(精子完全成熟期)达到初次性成熟;参与生殖排精后的精巢为第VI期(精子退化吸收期);精子发生过程经历初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子6个时相,其细胞及细胞核直径逐级减小,核质比发生规律性变化;电镜下显示精子发生过程中,细胞核内染色体逐渐浓缩,电子密度增加,线粒体数量减少,体积增大,內嵴结构逐渐丰富;精子由头部、中部和尾部组成,鞭毛轴丝为典型“9+2”结构。本研究阐述了四指马鲅雄鱼精巢的组织结构及初次性成熟精巢发育及精子发生过程的组织学和超微结构变化,丰富了四指马鲅的繁殖生物学内容,为掌握四指马鲅的繁殖规律和提高人工繁育技术提供理论参考。
水生生物学报 , 2015, 39(3):441-. doi:10.7541/2015.59
摘要:Ly-6/uPAR基因超家族(Ly-6 SF)成员广泛地存在于后生动物中, 开展该家族相关功能基因研究具有重要的意义。研究从银鲫(Carassius auratus gibelio)中鉴定到一个该家族新成员, cDNA全长为570 bp, 其中开放阅读框长度为300 bp, 编码99个氨基酸, 生物软件预测该蛋白含有一个LU结构域, 不含GPI锚信号序列, N端含有信号肽, 表明其可能为Ly-6基因超家族中分泌型蛋白。组织表达分析显示, 该基因只在银鲫精巢中特异表达, 且又是Ly-6基因超家族中一员, 因此将其命名为银鲫精巢特异的Ly-6/uPAR相关蛋白(Carassius auratus gibelio testis-specific Ly-6/uPAR related protein, 简称CagTslurp)。原位杂交结果显示, 该基因在银鲫精巢的精原细胞, 初级精母细胞以及次级精母细胞中表达, 精子细胞中存在少量的表达, 而在体细胞中不表达。这种精巢特异的表达模式, 暗示CagTslurp在银鲫精子发生中可能发挥了作用。
水产学报 , 2019, 43(2):400-. doi:10.11964/jfc.20180111147
摘要:为探索龟鳖类生殖细胞的发育分化机制, 实验通过特异性引物克隆了中华鳖dazl基因的cDNA片段,长1 007 bp,其中包括5′端非编码区197 bp,3′端非编码区33 bp,开放阅读框777 bp,编码258个氨基酸。氨基酸序列比对显示其与西部锦龟Dazl同源性最高,达96%;与小鼠Dazl同源性达75%。荧光定量PCR分析结果显示,中华鳖dazl mRNA主要在精巢和卵巢中表达,在体细胞组织中仅检测到微量表达。冰冻切片原位杂交结果显示,中华鳖dazlmRNA在生殖细胞中特异表达,且在不同时期的生殖细胞中呈动态表达模式。在精巢中,中华鳖dazl mRNA在初级和次级精母细胞中表达最强,在精原干细胞中表达水平次之,在精子细胞中未检测到信号;在卵巢中,中华鳖dazlmRNA信号在初级卵母细胞胞质中均匀分布且在最早期的初级卵母细胞中信号最强,随着卵母细胞的增大,信号逐渐聚集并逐渐减弱。研究表明,dazl基因可能对中华鳖两性生殖细胞的发生具有重要的调控作用。
大连海洋大学学报 , 2007, 22(5):319-. doi:
摘要:研究了不同浓度镉离子(0.005、0.1、0.5、1.0 mg/L)对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子发生的影响。结果显示:在光镜下观察,染毒第6、18 d后,各浓度组中间球海胆滤泡结构完好,生殖细胞发育情况同对照组基本一样;染毒第42 d后,0.5、1.0 mg/L Cd2+浓度组生精细胞排列混乱,滤泡膜破损;染毒第54 d后,各浓度组海胆性腺均出现滤泡解体现象。对染Cd2+54 d的0.5、1.0 mg/L组海胆精巢进行超薄切片观察,可见各级生精细胞亚显微结构变化明显,主要表现为核染色质异常凝集,核膜结构损伤,线粒体空泡化,精子形态畸形等。说明镉能影响中间球海胆的精子发生,导致精子质量下降。
上海海洋大学学报 , 2012, 21(2):199-. doi:
摘要:利用透射电镜(TEM)技术观察了魁蚶精子发生过程的超微结构变化。结果表明:魁蚶精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子形成等过程,在精子形成中的主要细胞学事件包括顶体的发育、核形态变化及尾部的形成等。此过程中,前顶体颗粒聚集、融合,形成顶体囊,然后发育为圆锥形顶体;核的形态由圆形或卵圆形变为鼓形,核内染色质由团块状到颗粒状,再到高电子密度均质;线粒体聚集、融合、体积变大,迁移至核的后端,参与精子中段的形成。成熟精子由头部、中段及尾部组成,头部由顶体及核构成,中段由5个线粒体围绕远端中心粒组成,尾部为细长的鞭毛。