渔业现代化 , 2017, 44(1):35-. doi:10.3969/j.issn.1007-9580.2017.01.007
摘要:双斑东方鲀(Takifugu bimaculatus)在福建已形成较大规模的养殖产业,但其精卵成熟同步率低、自然交配受精率低等繁殖特点已成为养殖规模化发展的最大制约因素。而精子超低温冷冻保存技术作为直接保存细胞遗传物质的一种有效方法,为双斑东方鲀规模化人工繁育问题的解决提供了方案。研究以复苏后的精子活力为选择指标,开展双斑东方鲀精子冷冻保存方法的研究,对抗冻剂、基础液、精子稀释浓度和降温程序等几个关键影响因素进行了筛选,获得了双斑东方鲀精子的最适冷冻方法:以含5%二甲亚砜(DMSO)的MPRS溶液与精子按1:1比例稀释,样品在4℃冰箱中平衡30 min,液氮上方10 cm处熏蒸5 min,再下降到5 cm处熏蒸5 min,之后投入液氮。按此方法保存的双斑东方鲀精子在解冻激活后,其活力可达(83±3)%,与相应卵子受精,可得到平均70%的孵化率,可以满足双斑东方鲀规模化人工繁育的需求。研究结果也可为其他东方鲀鱼类的相关研究提供参考。
中国水产科学 , 2014, 21(2):250-. doi:10.3724/SP.J.1118.2014.00250
摘要:实验所用翘嘴鳜(♀,Siniperca chuatsi) 2~3龄,体质量1 000~1 500 g;斑鳜(♂,Siniperca scherzeri Steindachner)1~2龄,体质量300~500 g。于繁殖季节选取成熟度好的亲鱼以促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)和马来酸地欧酮(DOM)进行催产。通过筛选D-15、D-17、Ringer液 和 M-Hank’s液4种稀释液和二甲基亚砜 (DMSO)、 甘油(Gly)、乙二醇 (EG)、1,2-丙二醇 (PG)和二甲基甲酰胺 (DMF)5种抗冻剂,发现DMSO和D-17分别是优选的抗冻剂和稀释液。以D-17作为斑鳜精子的稀释液,按照1︰3(精液︰稀释液)体积比稀释,添加10%体积的DMSO作为抗冻剂,按照三步冷冻法超低温冷冻保存,37℃水浴解冻的斑鳜精子,经CASA分析精子活率为(83.26±18.20)%,SCGE检测表明70%以上的精子核DNA不会发生损伤;FCM分析表明26.74%的解冻精子有完整的细胞膜且线粒体功能正常;用冷冻复苏斑鳜精子与翘嘴鳜精卵进行人工授精,最高受精率(39.6±6.5)%,温度24~28℃孵化时间38 h,孵化后的鱼苗发育正常,开口1周以后的鱼苗全长(1.346±0.255 ) cm,体高(0.438±0.103) cm,体质量(0.045±0.020) g。鲜精受精鱼苗和冻精受精鱼苗在开口后1周的生长没有显著差异。因此认为D-17+10% DMSO可用于斑鳜精液的超低温冷冻保存。本研究将有助于斑鳜种质资源的收集保存和冷冻保存的斑鳜精液在翘嘴鳜(♀)×斑鳜(♂)杂交中的应用。
渔业科学进展 , 2014, 35(5):97-. doi:10.11758/yykxjz.20140514
摘要:采用扫描和透射电镜技术对自然成熟的条纹锯(鱼旨)精子、卵子及精子入卵过程进行观察。观察结果显示,其精子由头部、中段和尾部三部分组成:头部主要由细胞核构成,无顶体结构;中段由线粒体、中心粒复合体(近端中心粒和基体)、袖套组成;尾部主要由轴丝组成,外部包裹质膜,轴丝为典型的“9+2”结构。卵子表面分布纵横交错的网纹,均匀分布着大小不一的微小孔,在卵壳的动物极精孔区的中央有一个受精孔。在授精后10 s即可见到精子通过受精孔进入卵子,刺激卵子发生形态变化封闭受精孔,阻止其他精子入卵,60 s可见受精孔完全封闭。
大连海洋大学学报 , 2009, 24(6):504-. doi:
摘要:为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05), GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。
海洋渔业 , 2014, 36(1):29-. doi:
摘要:对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(82±1.6)%,冻精与鲜精均无显著性差异。人工授精实验证明了解冻后的精子能正常用于该鱼的人工繁殖。
大连海洋大学学报 , 2020, 35(3):355-. doi:10.16535/j.cnki.dlhyxb.2020-031
摘要:为进一步探索卵胎生许氏平鲉Sebastes schlegelii繁殖生物学特性,探究超低温冷冻技术对精子形态结构的影响,对许氏平鲉(体质量500~750 g)鲜精和超低温冷冻后精子的超微结构进行了研究。结果表明:经扫描、透射电镜观察,发现精子在变态过程中细胞核纵向增长,细胞质浓缩,成熟精子头部呈叶片状,无顶体;线粒体多向尾部基部集中,为精子运动供能,鞭毛由线粒体及轴丝组成且具侧鳍结构;精子经冷冻保存后,虽有少部分形态正常,但多数出现尾部断裂、部分线粒体丢失及线粒体内膜嵴和细胞膜受损等现象。研究表明,卵胎生许氏平鲉精子的头部形状和线粒体数与其他卵生鱼类有较为显著的差别,超低温冷冻后,精子形态结构受到较大损伤,推测多数精子受精活力减弱或失去受精能力。
海洋渔业 , 2012, 34(4):438-. doi:
摘要:研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1P<0.05);其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK、SDH的活性分别从冻前的(60.16±5.88)U·mL-1、(11.91±0.76)U·mL-1和(51±2.16)U·mL-1下降到(3.54±0.37)U·mL-1、(10.22±0.32)U·mL-1和(31.5±2.08)U·mL-1;LDH、SOD和CAT活性从冻前的(7 806.44±110.11)U·L-1、(42.65±1.56)U·mL-1和(119.91±8.10)U·mL-1下降到(2 654.13±70.06)U·L-1、(31.99±1.57)U·mL-1和(55.87±2.32)U·mL-1。超低温冷冻保存对大黄鱼精子活力和精子酶活性均有显著影响。
大连海洋大学学报 , 2012, 27(2):53-. doi:
摘要:对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子的超低温保存技术进行了研究。以煮沸消毒海水为基础液,添加体积分数为10%的DMSO、体积分数为6%的甘油以及25 mmol/L海藻糖配制成冷冻保护液,与鲜精液按体积比以1:1混合,在4℃下平衡15 min,于液氮面上方15、3 cm处分别停留3 min和5 min,然后浸入液氮保存。结果表明:用此方法保存的精子解冻后其存活率可达58.2%,受精率达24.7%;解冻后精子受精时,在受精海水中分别添加0、28、56、112、280 mmol/L的葡萄糖, 56 mmol/L组的受精率高于其他组,受精率达26%;精子解冻后受精时,在受精海水中添加适量葡萄糖有助于提高受精率。本试验表明,冷冻过程中降温方式、冷冻保护液、平衡时间对精子的冷冻保存效果均有较大影响,各个因素通过优化组合可以大大提高解冻后精子的存活率和受精率。
大连海洋大学学报 , 2014, 29(2):141-. doi:10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.02.008
摘要:通过扫描电镜和透射电镜观察,研究了不同浓度的十溴联苯醚对太平洋鳕Gadus macrocephalus精子超微结构的影响。结果表明:与对照组相比,浓度为0.5、5、50、500 ng/L的十溴联苯醚对太平洋鳕精子的超微结构无显著影响,而浓度为5000 ng/L的十溴联苯醚对太平洋鳕精子的超微结构影响显著。扫描电镜下观察,在浓度为5000 ng/L十溴联苯醚中暴露2 h和4 h时,太平洋鳕精子的形态与对照组相比无显著变化,8 h时精子细胞核表面出现白色结晶状变化,12 h时精子细胞核破裂。透射电镜下观察,在浓度为5000 ng/L十溴联苯醚中暴露2 h时,太平洋鳕精子的形态与对照组相比无显著变化,4 h时精子出现质膜膨胀,线粒体移位,8 h时出现质膜破裂,线粒体内嵴断裂,甚至溶解,基质变浅,呈空泡样改变,12 h时鞭毛大量脱落堆积,部分微管结构解体甚至消失,线粒体内嵴结构基本消失。研究表明,十溴联苯醚主要作用于精子细胞的质膜、线粒体和鞭毛上,其毒性主要表现为质膜破裂,线粒体空泡样改变,鞭毛大量脱落,轴丝微管结构解体等。
淡水渔业 , 2016, 46(6):3-. doi:
摘要:在4℃条件下,以精子活力为指标,研究了不同浓度的Na+、K+、Ca2+、Mg2+、葡萄糖、氨基酸等组成的5种(A、B、C、D、E)精子保存液及其适量添加青霉素对黑尾近红鲌(Ancherythroculter nigrocauda)精子活力的影响。结果显示:1)温度为4℃时,精子活力达80%的保存液A、B、C、D、E的保存时间分别为48、24、60、48、48 h,保存液C的保存时间明显高于其它各组;2)在各保存液中分别添加浓度为2.0×104 IU/mL的青霉素,精子活力达80%的保存液A、B、C、D、E的保存时间分别为60、36、156、48、144 h,保存时间延长了12~96 h,保存液C和E的延长时间最长,均为96 h;3)人工授精试验证明,经保存的黑尾近红鲌精子能正常用于人工繁殖,受精率达(90.6±0.8)%~(91.8±0.9)%,与对照组精子受精率(92.4±0.8)%无显著差异。添加青霉素,保存液C的保存效果最好,其次是保存液E。