渔业现代化 , 2013, 40(2):1-. doi:10.3969/j.issn.1007-9580.2013.02.001
摘要:为了有效突破我国北方海域冬季网箱养殖品种少和产业发展缓慢的局面, 通过陆海接力养殖模式, 开展了云纹石斑鱼(Epinephelus moara)的网箱陆海接力养殖试验。结果显示:在莱州明波网箱基地选用的平均 个体重量 225 g 的大规格云纹石斑鱼鱼苗, 经过 2 个月的网箱接力养殖, 个体平均重量达到 350 g, 平均单尾 月增重 62.5 g, 成活率 92.02%; 在连云港众利网箱基地选用的个体平均重量 152 g 大规格云纹石斑鱼, 经过 4 个月的网箱接力养殖, 个体平均重量增加到 425 g, 平均单尾月增重 68.25 g, 养殖成活率达 96.00% 。石斑 鱼的网箱养殖与工厂化循环水养殖相比, 平均月增重速度提高 54.6% ~68.9%。
中国水产科学 , 2014, 21(4):647-. doi:10.3724/SP.J.1118.2014.00647
摘要:提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一.本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性.通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP.通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为76.6%.转红色荧光蛋白基因斑马鱼首代F0培育至性成熟,将其中的10尾F0斑马鱼分别与野生型斑马鱼进行配对繁殖,其中1个组合产生了体表呈现均匀红色荧光的F1个体,因此RFP在F0的整合率为10%.将红色荧光F1个体培育至性成熟并与野生型鱼配对繁殖,F2的阳性个体占69%.本研究结果说明,由Tgf2转座子介导的转基因技术,可有效提高目的基因的转植效率与整合效率,在转基因鱼构建以及相关研究中具有开发应用前景.
集美大学学报(自然科学版) , 2018, 23(2):91-. doi:
摘要:内参基因的稳定性对实时定量PCR的结果影响巨大。采用GeNorm、normFinder和RefFinder三款软件比较了鲍变态和干扰幼虫甲状腺激素受体(TR)两种情况下内参基因的稳定性。软件分析了EIF5AOAZ1YB1RPL3RPS9ACT等6个候选内参基因的Ct值,据此获得各基因的稳定值。在杂色鲍幼虫的变态过程中,EIF5A稳定性最高,排名平均数为1,表明该基因可以作为这一阶段实时定量PCR的内参基因,但是在干扰TR情况下,EIF5A的稳定性下降,排名平均数为3.91。RPS9则与之相反,在变态过程该基因表达稳定性最差,而在干扰TR时表达稳定性最好。ACT在两种情况下稳定性较好,排名平均数均位列第二位,可以作为这两种情况下的通用内参基因。其他基因的稳定性在这两种情况下也发生剧烈变换。这表明内参基因的稳定与样品具体处理情况关系密切。为了保证定量PCR结果的准确性,需要针对具体处理情况相应地进行内参基因的稳定性评估。
水产学报 , 2013, 37(1):109-. doi:10.3724/SP.J.1231.2013.38170
摘要:在前期研究中分离到一株草鱼呼肠孤病毒,GCRV-GD108,并获得其全基因组序列。该病毒株的M5基因编码VP5蛋白,该蛋白与哺乳动物正呼肠孤病毒μ2蛋白具有较高的同源性及相似的NTPase结合保守区域,推测VP5蛋白也同样具有NTPase活性。为检测VP5蛋白是否具有NTPase活性及其是否具有免疫保护作用,采用已构建的原核表达载体表达VP5重组蛋白,通过孔雀绿钼酸铵法检测纯化后的重组蛋白的NTPase活性。采用 DNAstar软件预测M5基因编码蛋白的抗原性,综合蛋白亲水性、表面可及性与表面抗原性三项指标,预测编码蛋白可形成抗原表位的氨基酸区域数多达86个,提示VP5蛋白具有较强的免疫原性。用重组蛋白VP5免疫健康草鱼,通过人工攻毒实验检测VP5蛋白的免疫保护作用。结果显示,VP5重组蛋白具有NTPase活性,且其NTPase活性依赖于Mg2+或Na+/K+,而Ca2+的存在可能抑制其活性;VP5蛋白可诱导草鱼产生高水平的抗体滴度,并显著提高IgM mRNA的表达水平,但未能为草鱼提供抗GCRV感染的保护。研究首次证实GCRV-GD108株VP5蛋白具有NTPase活性,但不能为草鱼提供免疫保护作用。