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紫外线照射对中华锯齿米虾胚胎发育的影响

水产科学 , 2021, 40(1):116-. doi:10.16378/j.cnki.1003-1111.19254

摘要：自抱卵的中华锯齿米虾雌虾腹部剥离取卵裂期、囊胚期、原肠胚期和无节幼体Ⅰ期的胚胎置于培养皿中，暴露在紫外线下，照射剂量分别为0、1、2、4、8、16 W·s/cm²，人工振荡培养箱中以速度55 r/min、温度25℃、湿度60%培养。每隔24 h在解剖镜下观察胚胎发育至48 h后进行数据分析，研究紫外线照射剂量对中华锯齿米虾胚胎发育的影响。结果表明，胚胎的存活率对紫外线具有明显的剂量依赖关系。随着紫外线照射剂量的增加，胚胎发育延缓。紫外线暴露后48 h的半数致死量分别为：卵裂期11.5 W·s/cm²、囊胚期8.6 W·s/cm²、原肠胚期12.0 W·s/cm²、无节幼体Ⅰ期14.2 W·s/cm²。相同的暴露剂量下，暴露时间对胚胎发育也有明显影响。

关键词：中华锯齿米虾 , 紫外线 , 胚胎发育 , 半数致死量

杂色鲍DAD1的克隆及在发育、弧菌感染、高温和缺氧下的表达分析

王国栋 , 和四梅 , 张丽莉 , 王艺磊

水产学报 , 2016, 40(7):1018-. doi:10.11964/jfc.20150609948

摘要：抗细胞凋亡因子（DAD1）是细胞凋亡的负调控因子。在杂色鲍转录组测序的基础上，通过RACE的方法，获得了杂色鲍DAD1基因的全长cDNA，命名为HdDAD1。该序列全长553 bp，开放阅读框339 bp，编码112个氨基酸。编码蛋白具有保守的DAD功能域和3段跨膜区。实时定量PCR结果表明，HdDAD1在杂色鲍所检测组织中均有表达，消化道、鳃、血细胞、粘液腺和肾脏中表达量最高。同样，HdDAD1在发育各阶段均有表达，幼虫阶段表达量最高，原肠胚次之，其他胚胎发育阶段和稚鲍表达量最低。HdDAD1能够响应细菌感染、高温和缺氧应激。在弧菌注射12 h后，表达量显著上升。当水温由最适的25℃上升到28℃时，HdDAD1表达量升高；在31℃持续4和96 h时HdDAD1表达量显著上升。在低氧处理4和96 h时，HdDAD1的表达量也显著上升。

关键词：杂色鲍;抗细胞凋亡因子(DAD1);基因表达;发育;应激

杂色鲍幼虫变态及TR干扰下内参基因的筛选

张丽莉 , 徐建波 , 王国栋 , 王艺磊

集美大学学报（自然科学版） , 2018, 23(2):91-. doi:

摘要：内参基因的稳定性对实时定量PCR的结果影响巨大。采用GeNorm、normFinder和RefFinder三款软件比较了鲍变态和干扰幼虫甲状腺激素受体（TR）两种情况下内参基因的稳定性。软件分析了EIF5A、OAZ1、YB1、RPL3、RPS9和ACT等6个候选内参基因的C_t值，据此获得各基因的稳定值。在杂色鲍幼虫的变态过程中，EIF5A稳定性最高，排名平均数为1，表明该基因可以作为这一阶段实时定量PCR的内参基因，但是在干扰TR情况下，EIF5A的稳定性下降，排名平均数为3.91。RPS9则与之相反，在变态过程该基因表达稳定性最差，而在干扰TR时表达稳定性最好。ACT在两种情况下稳定性较好，排名平均数均位列第二位，可以作为这两种情况下的通用内参基因。其他基因的稳定性在这两种情况下也发生剧烈变换。这表明内参基因的稳定与样品具体处理情况关系密切。为了保证定量PCR结果的准确性，需要针对具体处理情况相应地进行内参基因的稳定性评估。

关键词：杂色鲍 , 内参基因 , 稳定性

杂色鲍AP-1的克隆及在发育和弧菌感染后的表达分析

王国栋 , 和四梅 , 张丽莉 , 王艺磊

水产科学 , 2016, 35(3):227-. doi:10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.03.006

摘要：激活蛋白1（AP-1）是具有亮氨酸拉链功能域的转录因子，参与了发育和免疫等多个生物学过程。为研究该基因在杂色鲍发育和免疫中的作用，本研究克隆了杂色鲍AP-1基因的全长cDNA（命名为HdAP-1），并分析了HdAP-1在各组织、各发育时期以及副溶血弧菌刺激后的表达特征。结果表明，HdAP-1 cDNA全长为1482 bp，5'非编码区域（5'UTR）为133 bp，3'UTR为401 bp，开放阅读框为948 bp。该基因编码蛋白预测分子量为34.83 ku，等电点为9.43，具有典型AP-1蛋白家族的Jun转录因子功能域和bZIP功能域。HdAP-1在所检测7个组织中均有表达，其中血淋巴表达量最高，鳃、肾、肠和黏液腺的表达量次之，肝胰腺和外套膜表达量最低。自受精卵至囊胚期HdAP-1的表达量显著低于原肠胚（P<0.05），由原肠胚到担轮幼虫该基因表达量继续上升，担轮幼虫至匍匐幼虫期均维持较高的表达水平，变态后在稚鲍中的表达量下降。在副溶血弧菌感染24 h后，HdAP-1表达量显著上升（P<0.05）。其他时段该基因的表达量与对照组相比差异不显著（P>0.05）。

关键词：杂色鲍 , 激活蛋白(AP-1) , 基因表达 , 发育 , 细菌感染

杂色鲍一种编码CRAD功能域基因的克隆及其在发育和应激中的表达

张丽莉 , 和四梅 , 王国栋 , 王艺磊

水产学报 , 2018, 42(10):1520-. doi:10.11964/jfc.20170910959

摘要：为探讨Caspase募集功能域(CRAD)在鲍发育和应激中的作用，实验通过比对杂色鲍转录组序列和RACE扩增的方法，获得了杂色鲍一条含CRAD的基因全长cDNA，命名为HdCRAD；采用实时定量PCR的方法获得了该基因在发育和应激中的表达谱。结果显示，HdCRAD的cDNA全长1 371 bp，开放阅读框735 bp，编码244个氨基酸。编码蛋白具有保守的CRAD功能域。该基因在各检测组织中均可表达，在黏液腺中表达量最高；在发育各阶段也均有表达，面盘幼虫晚期表达量最高。在细菌感染、高温或缺氧应激处理后，血细胞的HdCRAD表达水平均有显著性变化。在担轮幼虫时期，RNA干扰该基因会显著提高幼虫畸形率；幼虫的caspase-8和DAD1的表达水平会显著上升，而caspase-3的表达水平会下降。研究表明，该基因参与了鲍幼虫发育过程；在成体免疫、耐高温和抗低氧中发挥了一定作用。

关键词：杂色鲍 , Caspase募集功能域(CRAD) , 基因表达 , 发育 , 应激 , RNAi

滤食性贝类采收微藻技术

王国栋 , 张丽莉 , 黄世玉 , 谢仰杰

科学养鱼 , 2015, 31(12):67-. doi:

摘要：微藻是一类由单细胞或数个细胞组成的微小藻类，直径3～30微米，多为真核生物。微藻生长速度快、单位面积产量高，而且营养丰富，富含蛋白质、维生素和不饱和脂肪酸等。广泛应用于生物饵料、保健食品和制药等领域。

关键词：

鲍幼虫变态分子机制的研究进展

王国栋 , 张丽莉 , 王艺磊

集美大学学报（自然科学版） , 2012, 17(2):101-. doi:

摘要：综述了鲍幼虫变态及其分子机制的研究进展.鲍因其幼虫营卵黄营养,且同昆虫和蛙类相比,鲍幼虫变态速度快、存在提早发育(‘anticipatory’ developmental program)现象,是研究贝类乃至海洋无脊椎动物变态现象的理想模式.早期研究采用药理学和电生理学方法发现了GABA等能够诱导鲍变态的物质,并且提出了变态过程信号通路,但调节幼虫变态的分子机制仍然所知甚少.研究人员采用差异显示PCR和基因芯片等手段获得了一些变态前后差异表达的基因.但是变态是由众多的基因和信号分子共同决定和影响的.传统获得差异基因的方法效率低、获得基因数量少、受公布的EST(表达序列标签)限制大,所以调控变态的分子网络和机制还尚未建立,缺乏对调控这一细胞过程的整体认识.转录组学分析获得大量变态差异基因,并且有助于建立差异基因相互作用网络,是研究变态分子机制的新方向.此外,变态差异基因的功能验证和注释是鲍变态分子机制研究的另一问题,基因干扰可能是解决方向之一.

关键词：鲍 , 幼虫 , 变态 , 分子机制