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水产学报 , 2015, 39(9):1273-. doi:10.11964/jfc.20150309785

摘要：在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与体细胞分离,形成所谓的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)。母源性基因Dead end(dnd)在胚胎发育中特异地表达于原始生殖细胞,编码一种进化上保守的RNA结合蛋白,对生殖细胞发育具有重要作用。本研究通过PCR获得大黄鱼dnd基因(Lcdnd)的部分cDNA序列,结合实时定量PCR、整胚原位杂交等技术,研究Lcdnd在各组织和胚胎发育中的表达。实时定量PCR结果显示:dnd在性腺中特异表达,且其在卵巢中的表达量高于精巢; 检测的各期胚胎中都有dnd的表达,随着胚胎发育其表达量呈下降趋势。整胚原位杂交结果显示:Lcdnd在早期卵裂阶段主要分布于分裂沟,到囊胚期至原肠早期则开始定位于细胞内,原肠早期时定位在胚环中的中内胚层,且阳性信号增多,暗示此时原始生殖细胞的形成。接着原始生殖细胞沿胚环向胚体形成处(胚盾)迁移; 随着胚胎的发育,发现胚体两侧的阳性信号增多; 到体节发生期,阳性信号细胞分布于胚体两侧的侧板中胚层,随着体节的发生这些细胞沿背腹轴向腹部运动; 发育到孵出期时,到达了发育中的原始生殖嵴。本研究首次使用dnd作为较为可靠的大黄鱼生殖细胞标记,揭示了大黄鱼原始生殖细胞的起源与迁移,为大黄鱼生殖细胞发生发育及养殖大黄鱼的育性控制研究奠定一定的基础。

关键词：大黄鱼 , 原始生殖细胞 , 胚胎发育 , dnd基因 , 生殖细胞标记

杂色鲍紫色酸性磷酸酯酶基因克隆及应激下的表达

黄贻涛 , 蔡秀红 , 张子平 , 王国栋 , 邹志华 , 王淑红 , 王艺磊

中国水产科学 , 2013, 20(5):939-. doi:10.3724/SP.J.1118.2013.00939

摘要：利用本实验室获得的杂色鲍(Haliotis diversicolor)转录组测序数据库, 筛选出杂色鲍紫色酸性磷酸酯酶(Purple acid phosphatase, PAP)同源片段, 进而克隆获得PAP 的cDNA 全序列, 命名为HdPAP, 并进行了HdPAP 蛋白的结构分析和功能预测, 同时利用实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析HdPAP 基因的组织表达谱和应激条件下的HdPAP 表达变化。HdPAP 基因cDNA 全长1 215 bp, 含有1 个编码322 个氨基酸的969 bp 的开放阅读框。经Blast比对, 与无脊椎动物半索动物门囊舌虫(Saccoglossus kowalevskii)的PAP 氨基酸序列一致性最高, 达59%。通过实时定量PCR 检测, HdPAP 在检测的杂色鲍各组织中均有表达, 其中在血细胞和肝胰腺的表达量显著高于其他各组织(P<0.05)。高温应激下, 在检测的6 个时相中, HdPAP 在血细胞、肝胰腺和鳃中均出现不同程度的表达抑制。缺氧应激后, 4 h 血细胞中HdPAP 显著低于对照组, 24 h 恢复到正常水平, 96 h 显著高于对照组(P<0.05), 到192 h 又恢复到正常水平。副溶血弧菌感染实验中检测到HdPAP 在血细胞中同样出现表达抑制现象, 3 h 和6 h 均检测到感染组HdPAP 表达量显著低于对照组(P<0.05)。PAP 在高温、缺氧及弧菌感染下显著的表达抑制从转录水平揭示了其作为表达下调的酯酶可能参与胁迫下的生物代谢和免疫反应。

关键词：杂色鲍 , 紫色酸性磷酸酯酶 , 高温 , 缺氧 , 副溶血弧菌

杂色鲍同种移植炎症因子1的克隆及其在应激下的表达

黄贻涛 , 蔡秀红 , 张子平 , 王国栋 , 邹志华 , 王淑红 , 王艺磊

水产学报 , 2013, 37(6):830-. doi:10.3724/SP.J.1231.2013.38463

摘要：同种移植炎症因子AIF-1(allograft inflammatory factor 1,AIF-1)是一种由干扰素γ诱导的含有EF-hand结构域的钙离子结合蛋白,其功能主要是参与移植排斥、免疫炎症反应、自身炎性和非炎性的损伤等。首次克隆了杂色鲍AIF-1基因cDNA全序列,命名为HdAIF-1,其全长为942 bp,开放阅读框为456 bp,编码151个氨基酸。实时荧光定量PCR结果表明: HdAIF-1在杂色鲍各组织中均有表达,其中在血淋巴和鳃中表达量最高。高温应激下,HdAIF-1在鳃组织中各时相表达均显著上调,并在温度升至31 ℃时达到最高。而血淋巴和肝胰腺中HdAIF-1在高温应激前4个时相表达无显著差异,到了96 h均显著上调。缺氧应激下,HdAIF-1在血淋巴中表达变化没有显著差异,而鳃中24 h显著下调,192 h显著上调。副溶血弧菌感染实验表明HdAIF-1基因在感染后3、24 和48 h均检测到HdAIF-1的表达量显著上调。高温和缺氧应激以及弧菌感染均显示HdAIF-1基因表达量发生显著变化,说明HdAIF-1可能作为免疫因子在杂色鲍应激等状况下发挥重要作用。

关键词：杂色鲍 , 同种移植炎症因子 , 高温 , 缺氧 , 副溶血弧菌

17α, 20β双羟孕酮诱导鲤卵母细胞最终成熟相关基因表达内参基因的筛选

史艳艳 , 卢洁 , 王艺磊 , 王淑红

中国水产科学 , 2014, 21(5):910-. doi:10.3724/SP.J.1118.2014.00910

摘要：本研究检测了18S rRNA(18S)、28S rRNA(28S)、组织蛋白酶Z(cathepsin Z, CTSZ)、延伸因子1-α(elongation factor 1-α, EF-1α)、3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, gapdh)、β 肌动蛋白(β-actin)6 个候选内参基因在17α, 20β 双羟孕酮(DHP)诱导鲤(Cyprinus carpio)卵母细胞最终成熟过程的表达情况, 并应用不同的内参分析软件对数据进行了分析。Bestkeeper 软件分析表明EF-1α 的变异系数和标准差是6 个候选内参基因中最低的, 且Bestkeeper 指数在6 个候选内参基因中最高, 说明其表达稳定性最高, 适合做为内参基因;geNorm 软件分析认为需要同时使用EF-1α 和CTSZ 两个内参基因来校正目标基因的表达;NormFinder 软件分析同样表明EF-1α是6 个候选内参基因中表达最稳定的;最后通过RefFinder 软件综合比较分析, 确定EF-1α 相对于其他5 个候选内参基因, 在17α, 20β 双羟孕酮诱导卵母细胞最终成熟阶段表达最为稳定, 可作为内参校正17α, 20β 双羟孕酮诱导鲤卵母细胞最终成熟阶段各基因的表达情况。

关键词：鲤 , 17α, 20β 双羟孕酮 , 基因表达 , 内参基因 , 卵母细胞最终成熟 , 实时荧光定量PCR