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黄姑鱼(Nibea albiflora)gsdf基因的克隆及表达分析

集美大学学报（自然科学版） , 2018, 23(2):81-. doi:

摘要：为探索gsdf（gonadal soma derived factor）基因对黄姑鱼性别分化和性腺发育的作用，克隆了黄姑鱼gsdf基因ORF序列全长，并运用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术检测了该基因在黄姑鱼不同组织和不同发育时期性腺中的表达情况。结果显示：黄姑鱼gsdf基因开放阅读框长648 bp，可编码215个氨基酸，含有TGF-β超家族的保守功能结构域；组织表达分析结果显示，黄姑鱼gsdf基因主要集中在精巢中表达；在23℃左右水温下，孵化后40 d的遗传雄性鱼苗性腺中开始检测到gsdf基因有明显表达（此时组织学上尚看不出精巢形态），49 d后表达量迅速升高，孵化120 d后（精巢分化完成）表达量达到高峰，随后表达量开始下降，直到黄姑鱼精巢成熟之后呈现稳定表达。上述结果提示，黄姑鱼gsdf基因与黄姑鱼性别决定和分化发育过程密切相关。

关键词：黄姑鱼 , gsdf基因 , 组织表达 , 时序表达

黄姑鱼雌核发育诱导及鉴定

杨育凯 , 谢仰杰 , 蔡明夷 , 简林江 , 陈庆凯 , 楼宝 , 王志勇

水产学报 , 2013, 37(9):1297-. doi:10.3724/SP.J.1231.2013.38437

摘要：为建立黄姑鱼雌核发育诱导方法,实验利用紫外线照射使黄姑鱼精子遗传失活,与卵子授精后再通过冷休克抑制极体排放进行倍性恢复,成功诱导出黄姑鱼雌核发育二倍体。精子经强度为3 800 μW/(cm2·s)的紫外线照射10～100 s,受精卵孵化率呈现明显的Hertwig效应;当照射时长达到60 s以上,各实验组全部孵出仔鱼均呈现单倍体综合症。精子的紫外线照射时间、受精卵冷休克起始和持续时间等三因素三水平正交实验结果表明,精子经紫外线照射60 s,受精2 min后卵子在3～4 ℃海水中持续冷休克10 min为最佳诱导条件组合,可以获得最高的孵化率(16%)。最佳组合仔鱼形态和细胞相对DNA含量与正常二倍体一致,经微卫星标记检验证明全部不含有父本基因,为雌核发育二倍体。实验报道了成功诱导黄姑鱼雌核发育二倍体的条件,为进一步开展黄姑鱼良种选育和性别控制工作奠定了基础。

关键词：黄姑鱼 , 雌核发育 , 冷休克 , DNA相对含量 , 微卫星标记

大黄鱼形态指标体系及雌雄差异分析

谌微 , 王盼盼 , 肖世俊 , 刘洋 , 叶坤 , 陈庆凯 , 王志勇

集美大学学报（自然科学版） , 2014, 19(6):401-. doi:

摘要：为研究大黄鱼主要形态指标及雌雄形态差异, 测量及分析了554尾大黄鱼12项计量性状及11项标准化性状.主成分分析表明, 大黄鱼主要形态指标可分为整体框架结构、肥瘦程度、头部与吻长、躯干及尾部和胸腔纵切面大小5个指标; 对计量性状分析显示, 雌鱼个体间变异较雄鱼更大, 雌雄形态差异较大的有体重、体高及体厚; 对标准化性状分析显示, 丰满度、体长∶体高、体长∶体厚、头长∶眼径及尾长∶尾柄高等5项性状的差异达到极显著水平(P<0.01), 其中以体长∶体厚差异最大.这些性状可为雌雄辨别提供参考.

关键词：大黄鱼 , 形态指标 , 计量性状 , 形态差异

黑棘鲷仔鱼饥饿实验及不可逆点的确定

杨育凯 , 林黑着 , 王志勇 , 谢仰杰 , 郭奕惠 , 黄小林 , 李涛

渔业科学进展 , 2020, 41(2):87-. doi:10.19663/j.issn2095-9869.20190104001

摘要：在水温18℃~19℃条件下，采用实验生态学方法研究了饥饿对黑棘鲷（Acanthopagrus schlegelii）仔鱼存活、生长发育及行为学特征的影响。通过测定仔鱼的初次摄食率和饥饿不可逆点（PNR），确定了初次投喂的最佳时间。结果显示，黑棘鲷仔鱼3日龄开口摄食，4日龄卵黄囊消失，6日龄油球消失，混合营养期仅3 d，属容易遭受饥饿胁迫的鱼类。仔鱼开口时初次摄食率仅为30%，之后迅速提高，至5日龄达到最高的90%，之后逐渐下降，7日龄降至45%，到达PNR。饥饿组仔鱼在6日龄后开始出现生理性萎缩，全长与对照组相比差异显著（P<0.05），进入PNR后，仔鱼活动能力显著下降，身体出现扭曲、畸形，死亡率急剧升高，至10日龄全部死亡。黑棘鲷仔鱼耐受饥饿能力较弱，建议开始投饵的最适时机为仔鱼开口后的4 d内。

关键词：黑棘鲷 , 仔鱼 , 饥饿 , 不可逆点

大黄鱼sox9a/b基因的克隆与表达分析

张梦 , 朱阳阳 , 李完波 , 沈伟良 , 吴雄飞 , 叶坤 , 王志勇

水产学报 , 2019, 43(8):1691-. doi:10.11964/jfc.20181111531

摘要：为探究sox9基因在大黄鱼性别决定与分化过程中的作用，利用RACE方法克隆得到大黄鱼sox9a和sox9b 2个基因，采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析其在雌雄个体不同组织和不同发育阶段的表达规律，并检测了其在17β-雌二醇处理后的遗传雄性和17α-甲基睾酮诱导处理后遗传雌性幼鱼中的表达变化。结果显示，大黄鱼sox9a cDNA全长2 442 bp (NCBI登录号：MH996431)，包含476 bp 5′UTR、466 bp 3′UTR、1 500 bp ORF，编码499个氨基酸。大黄鱼sox9b cDNA全长为2 199 bp (NCBI登录号：MH996432)，包含335 bp 5′UTR、415 bp 3′UTR、1 449 bp ORF，编码482个氨基酸。qRT-PCR分析显示，sox9a基因主要在性腺、眼、脑、肝脏中表达，精巢中的表达量显著高于卵巢；sox9b在大黄鱼各组织中广泛表达，但以精巢中表达量最高，而卵巢中只有痕量表达。在鱼苗性腺发育初期，sox9a/b的表达量都维持在较低水平；随着鱼苗长大，sox9a/b的表达量在84 dph、123 dph 2次达到高峰，随后开始下降，10 mph后又逐渐上升。17β-雌二醇处理能够显著下调遗传雄性大黄鱼sox9a和sox9b基因在性腺中的表达，17α-甲基睾酮处理则显著上调遗传雌性大黄鱼sox9a和sox9b基因在性腺中的表达。研究表明，sox9a/b基因与大黄鱼性别发育和分化过程密切相关，对大黄鱼精巢的发育与维持起重要的调控作用，而且两个基因的功能可能具有一定程度的分化。

关键词：大黄鱼 , sox9a/b基因 , 克隆 , 表达

脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对大黄鱼幼鱼生长、体成分、血清生化指标及抗氧化能力的影响

韩星星 , 叶坤 , 王志勇 , 陈丰林 , 柴志强 , 詹炜 , 王秋荣

中国水产科学 , 2020, 27(5):524-. doi:10.3724/SP.J.1118.2020.19306

摘要：本实验旨在探讨脱脂黑水虻（Hermetia illucens）虫粉（DBSFLM）替代鱼粉（FM）对大黄鱼（Larimichthys crocea）幼鱼生长、体成分、血清生化指标及抗氧化能力的影响。实验设计6组等氮（粗蛋白45%）等脂（粗脂肪10%）饲料，用黑水虻脱脂虫粉分别替代饲料中0%、20%、40%、60%、80%和100%的鱼粉蛋白，分别记为G0、G20、G40、G60、G80和G100。选用2160尾平均体重为（50.08±3.31）g的大黄鱼幼鱼随机分为6组，每组3个重复，每个重复120尾，在室内水泥池（2 m×1 m×1 m）进行为期7周的投喂实验。结果表明：（1）G100组大黄鱼幼鱼存活率显著低于其他实验组，G40组大黄鱼增重率（WGR）、蛋白质效率（PER）均显著高于其他组（P<0.05）；（2）大黄鱼肌肉粗蛋白含量随着DBSFLM替代FM水平的增加而下降，替代40%及以上鱼体粗蛋白含量显著降低（P<0.05）；肌肉的粗脂肪和粗灰分含量则随DBSFLM替代FM水平的增加而升高，其中替代60%及以上鱼体粗脂肪和粗灰分含量显著升高（P<0.05）；（3）随着替代水平的升高（>40%），大黄鱼血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性显著上升（P<0.05），甘油三酯（TG）和胆固醇（CHOL）水平显著下降（P<0.05）；（4）G20组大黄鱼肝脏总抗氧化能力（T-AOC）及G40组实验鱼肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性均为最高，G40组大黄鱼肝脏丙二醛（MDA）含量最低。过氧化氢酶（CAT）活性随着DBSFLM替代FM水平升高呈现下降趋势，替代40%及以上CAT活性显著下降（P<0.05）。综上所述，在本实验条件下，脱脂黑水虻虫粉替代饲料中40%鱼粉蛋白对大黄鱼幼鱼的生长性能、体成分及健康状况无负面影响。

关键词：大黄鱼;脱脂黑水虻虫粉;生长;体成分;血清生化指标;抗氧化能力

黄姑鱼异质雌核发育子代的遗传分析

谢仰杰 , 杨育凯 , 王志勇 , 蔡明夷 , 翁朝红

中国水产科学 , 2020, 27(11):1285-. doi:10.3724/SP.J.1118.2020.20186

摘要：为了解黄姑鱼（Nibea albiflora）异质雌核发育子代的基因纯合情况，利用微卫星标记（SSR）和扩增片段长度多态性标记（AFLP）对黄姑鱼异质雌核发育家系进行遗传鉴定和分析。结果显示：（1）雌核发育家系在4个SSR位点和5对AFLP引物组合扩增出的位点均未发现父本特异性等位条带，表明雌核发育体比率为100%。（2）用于遗传分析的7个SSR位点在雌核发育家系和正常交配家系中均未见完全纯合的情况，雌核发育家系7个SSR位点的平均纯合度为0.382，是正常交配家系（0.161）的2.37倍。雌核发育家系各个体的纯合位点数为0~6个，纯合位点所占比例为0~85.7%。（3）5对AFLP引物共扩增出182条清晰的扩增条带，其中有21条父本特异性条带和16条母本特异性条带。16条母本特异性条带中有7个条带在雌核发育家系中显著偏分离（P<0.05）。雌核发育家系和正常交配家系多态性条带比例分别为14.7%和20.3%。（4）雌核发育家系与母本的遗传相似度高于与正常交配家系的遗传相似度，正常交配家系同父本和母本的遗传距离大致相同。研究结果表明，黄姑鱼异质雌核发育二倍体家系的遗传纯合度显著高于正常交配家系，人工诱导雌核发育是促进基因纯合的一个有效途径，它不仅可以加速有利基因的纯合固定，还可以加速有害基因的淘汰，从而有效提高育种效率。

关键词：黄姑鱼 , 雌核发育 , 遗传分析 , 基因纯合度

低盐养殖大黄鱼部分器官的组织学特征

金希哲 , 陈庆凯 , 叶坤 , 龚诗琦 , 王志勇 , 谢仰杰

集美大学学报（自然科学版） , 2015, 20(2):90-. doi:

摘要：对低盐养殖大黄鱼(低盐组)与正常海水养殖大黄鱼(对照组)的肥满度、肝体指数和鳃、肾、肝、性腺的组织学特征进行了比较.结果表明:生物学参数方面,低盐组大黄鱼的体长(17.31±1.76)cm、体重(56.31±13.85)g、肥满度(1.08±0.14)和肝体指数(0.50±0.11)均显著低于对照组(体长(23.85±1.13)cm,体重(267.91±42.74)g,肥满度(1.96±0.10)及肝体指数(1.16±0.12));组织学特征方面,低盐组与对照组相比,低盐组的鳃丝明显较宽,鳃小片上皮细胞增生、肥大,部分鳃小片上皮明显隆起、上皮细胞脱落、坏死,黏液细胞体积变大且数目大量增多,泌氯细胞数量大量增加且胞体变大;低盐组肾小体体积膨大,各级肾小管管径变大,肝细胞肿大、变形,出现大量空泡,部分肝细胞细胞核偏离细胞中心.低盐组大黄鱼性腺中,切片所得多为第Ⅱ、第Ⅲ时相卵母细胞,第Ⅳ时相卵母细胞几不可见,第Ⅲ时相卵母细胞不够饱满,脂肪滴小而密,且卵黄集中在细胞膜内缘,相对于对照组明显偏少.

关键词：大黄鱼 , 低盐养殖 , 鳃 , 肾 , 肝 , 性腺 , 组织学

核糖体DNA在厦门白姑鱼和大黄鱼染色体上的比较定位

廖梦香 , 郑娇 , 王志勇 , 张静 , 刘贤德 , 蔡明夷

水产学报 , 2017, 41(9):1338-. doi:10.11964/jfc.20160910560

摘要：为了探究石首鱼核型微观结构上的变化，实验利用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)比较定位了厦门白姑鱼和大黄鱼18S rDNA和5S rDNA的分布特征。结果表明，厦门白姑鱼与大黄鱼在宏观核型以及18S rDNA和5S rDNA染色体分布等3个方面均存在较大差异。厦门白姑鱼的核型公式为2n=48t，臂数 FN=48；单对18S rDNA信号分布于1号染色体臂间；单对5S rDNA信号分布于3号染色体近着丝粒区域。大黄鱼的核型公式为2n=2sm+4st+42t，臂数FN=50；单对18S rDNA信号分布于18号染色体短臂端部；5S rDNA信号9~11对，除一对分布于臂间外，其余全部分布于着丝粒端或短臂端部。综合其他石首鱼核型数据可以推断：厦门白姑鱼呈现原始核型特征，而大黄鱼核型是原始核型经染色体重排和/或转座衍生的特化核型；石首鱼宏观核型和18S rDNA分布模式总体保守，仅少数物种存在变化，而5S rDNA位点的分布模式存在高度的种间变化。本研究首次揭示了石首鱼物种间核型微观结构的变化，为进一步开展石首鱼分子细胞遗传学研究奠定了基础。

关键词：厦门白姑鱼 , 大黄鱼 , 染色体 , 荧光原位杂交 , rDNA