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ISSN 1005-8737

主管 中华人民共和国农业部

主办 中国水产科学研究院,中国水产学会,中国科技出版传媒股份有限公司

半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化

2014. 半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化. 中国水产科学, 21(5): 920-928. doi: 10.3724/SP.J.1118.2014.00920
引用本文: 2014. 半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化. 中国水产科学, 21(5): 920-928. doi: 10.3724/SP.J.1118.2014.00920
FENG Wenrong, LIU Shufang, ZHUANG Zhimeng, MA Qian, SU Yongquan, TANG Qisheng. 2014. Optimization of quantitative PCR-based measurement of mitochondrial DNA content in different tissues of Cynoglossus semilaevis. Journal of Fishery Sciences of China, 21(5): 920-928. doi: 10.3724/SP.J.1118.2014.00920
Citation: FENG Wenrong, LIU Shufang, ZHUANG Zhimeng, MA Qian, SU Yongquan, TANG Qisheng. 2014. Optimization of quantitative PCR-based measurement of mitochondrial DNA content in different tissues of Cynoglossus semilaevis. Journal of Fishery Sciences of China, 21(5): 920-928. doi: 10.3724/SP.J.1118.2014.00920

半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化

  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(31172411, 31201981)

    国家国际科技合作专项项目(2013DFA31410).

详细信息
    作者简介:

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.;

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.;

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.;

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.;

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.;

    冯文荣(1986-), 女, 博士研究生, 从事渔业资源分子生态学研究.

    通讯作者: , E-mail: fengwenrong1@163.com
  • 中图分类号: S917

Optimization of quantitative PCR-based measurement of mitochondrial DNA content in different tissues of Cynoglossus semilaevis

  • Fund Project: 国家国际科技合作专项项目(2013DFA31410).
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  • 本研究旨在应用实时荧光定量PCR 技术, 建立半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体DNA(mtDNA)含量测定方法并进行优化。通过质粒标准品的线性化处理、模板DNA 的酶切和超声处理、mtDNA 和核DNA(nDNA)基因引物的筛选实验, 建立半滑舌鳎mtDNA 含量测定方法。结果表明, 质粒标准品的构象对荧光定量PCR 标准曲线影响较大, 线性化的质粒更适合用作标准品;酚-氯仿方法提取的模板DNA 适用于mtDNA 含量测定, 无需进行预处理;用D-loop 和ND1 这2 对引物所得的拷贝数较小且结果一致, 适用于mtDNA 拷贝数的测定;以不同核基因为参照所得的mtDNA 含量可能存在差异, 当以单拷贝核基因ENC1 和MYH6 为参照时, 可以计算出单个细胞中mtDNA 含量, 若以多拷贝基因GAPDH 为参照, mtDNA 含量测定值则较小。采用本方法分别对半滑舌鳎肝、肾、脾和肌肉组织的mtDNA 含量进行重复性检测实验, 结果表明, 相同组织的mtDNA 含量显示出良好的重复性(P>0.05),而不同组织中mtDNA 含量具有差异性, 可见该方法稳定可靠, 能为海洋鱼类mtDNA 含量检测提供借鉴。
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出版历程
收稿日期:  2013-12-07
修回日期:  2014-03-11

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